Elaboración de preparaciones: Medios de montaje y colorantes


Introducción

La identificación y observación directa de las características microscópicas de los mohos toxígenos es muy importante en el laboratorio de micología, ya que generalmente al observar su micromorfología podemos determinar el género e incluso la especie al cual corresponde. Para ello es necesario elaborar preparaciones las cuales pueden ser temporales elaboradas con agua y/o un colorante o semipermanentes con algún medio de montaje y si es necesario un colorante especialmente cuando las estructuras fúngicas son hialinas.



tab1

Preparaciones semipermanentes

tab1

Con una aguja de disección o asa microbiológica previamente flameada en un mechero, dejar enfriar y bajo condiciones de asepsia tome una porción pequeña de la colonia del hongo.
tab1

Colóquela en un portaobjetos sobre una gota de medio de montaje y/o colorante, dilacerar cuidadosamente el fragmento miceliar.
tab1

Colocar un cubreobjetos dejándolo caer cuidadosamente de forma inclinada sobre la muestra, para evitar la formación de burbujas de aire, si queda exceso de colorante o medio de montaje en el borde del cubreobjetos quitar el excedente con un pañuelo desechable o un cotonete, también se puede presionar ligeramente con la goma de un lápiz para eliminar las burbujas de aire. Si desea conservar por un mayor periodo de tiempo la preparación sellar el borde del cubreobjetos con varias capas de barniz de uñas transparente, dejar secar.
tab1

Observar en el microscopio compuesto de campo claro.

Preparación temporal con cinta adhesiva

Para elaborar preparaciones temporales una técnica útil es la de cinta adhesiva transparente (también llamada técnica de bandera) la cual permite observar estructuras frágiles (origen de los conidios, cadenas de conidios, entre otras) de los hongos que en una preparación semipermanente en ocasiones es difícil de lograr.

tab1

Corte un fragmento de cinta adhesiva (1.5 a 2 cm) y colóquela en la punta de una aguja de disección o asa micológica, bajo condiciones de asepsia abra la caja de Petri con la colonia de hongo y con el lado del pegamento presione ligeramente la colonia.
tab1

Posteriormente coloque el fragmento de la cinta con el pegamento hacia abajo sobre un portaobjetos con una gota de agua destilada, medio de montaje y/o colorante.
tab1

Si lo considera conveniente puede colocar un cubreobjetos sobre la muestra y un poco más de colorante o medio de montaje si es necesario. Observar en el microscopio compuesto de campo claro.

Medios de montaje

Ácido láctico.
Preserva las estructuras fúngicas al provocar un cambio de gradiente osmótico con relación al interior de la célula, lo que genera una película protectora. Se le puede adicionar fucsina ácida, o azul de algodón al ácido láctico (0.1 w/v) para observar y examinar las estructuras fúngicas.



tab1



Alcohol polivinílico

Preparación


tab1

El alcohol polivinílico se disuelve en el agua destilada, se agita fuertemente y se le adicionan los 10 ml de ácido láctico y el mililitro de glicerol. Para homogenizar si es necesario de esteriliza por 5 min. Se deja reposar por 4 h. Vaciar y conservar en un frasco gotero ámbar. Una vez elaboradas las preparaciones, se dejan secar a 40°C por 24 a 36 h.

Usos


tab1

Se emplea para la observación de estructuras microscópicas de diferentes especies de hongos. Este medio de montaje permite conservar las preparaciones por un periodo de tiempo largo, además presenta la ventaja que no se tiene que sellar la preparación con barniz de uñas.

Colorantes

Fucsina ácida

tab1

Empleado para la tinción de hongos microscópicos.

Fucsina ácida 1.0 g
Agua destilada 100 ml

Mezclar el colorante con el agua destilada y conservar en un frasco gotero ámbar a temperatura ambiente.

Azul de algodón acidificado.

tab1

Es un colorante ácido también conocido como azul de anilina, que tiñe el citoplasma y la quitina presente en la pared de las células fúngicas.

Azul de algodón 0.1 g
Agua destilada 100 ml
Ácido láctico (85%) 50 ml

Mezclar vigorosamente el azul de algodón con el agua, adicionar el ácido y mezclar de nuevo, conservar en un frasco gotero ámbar a temperatura ambiente.

Azul de algodón no acidificado

tab1

Sirve para teñir la mayoría de las estructuras fúngicas.

Azul de algodón 0.05 g
Agua destilada 100 ml

Mezclar vigorosamente el azul de algodón con el agua destilada, conservar en un frasco gotero ámbar a temperatura ambiente.

Bibliografía

Ir a la siguiente sección:

Protocolo de producción de aflatoxinas

UNAM-DGAPA-PAPIME
Proyecto PE206620

Colaboración


Dra. María Cristina Julia Pérez Reyes
Dra. Gabriela Sánchez Hernández
M. en C. Rebeca Martínez Flores
M. en C. José Luís Garza Rivera
M.C.yT.E. Juan Espinosa Rodríguez

Dra. María Cristina Julia Pérez Reyes
Responsable de proyecto

crisp28@yahoo.com.mx

Dra. Gabriela Sánchez Hernández
Corresponsable de proyecto

gasaher@yahoo.com


Agradecimientos a:

D.G. Luz Gabriela Flores Sánchez
Ilustración digital y animación

Dra. Nallely Cano Domínguez
Colaboración y revisión de protocolos de biología molecular